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HPLC液相色譜儀技術(shù)入門(mén)者須知

更新時(shí)間:2021-05-08  點(diǎn)擊次數(shù):1561
        HPLC液相色譜儀廣泛存在于當(dāng)前應(yīng)用和發(fā)展較廣泛、較有潛力的領(lǐng)域,包括生物、醫(yī)藥、環(huán)境等方面,它適于易揮發(fā)、半揮發(fā)性有機(jī)小分子化合物的分析。
  HPLC液相色譜儀的技術(shù)原理:
  分配系數(shù)與組分、流動(dòng)相和固定相的熱力學(xué)性質(zhì)有關(guān),也與溫度、壓力有關(guān)。在不同的色譜分離機(jī)制中,K有不同的概念:吸附色譜法為吸附系數(shù),離子交換色譜法為選擇性系數(shù) (或稱(chēng)交換系數(shù)),凝膠色譜法為滲透參數(shù)。但一般情況可用分配系數(shù)來(lái)表示。
  在條件(流動(dòng)相、固定相、溫度和壓力等)一定,樣品濃度很低時(shí)(Cs、Cm很小)時(shí),K只取決于組分的性質(zhì),而與濃度無(wú)關(guān)。這只是理想狀態(tài)下的色譜條件,在這種條件下,得到的色譜峰為正常峰;在許多情況下,隨著濃度的增大,K減小,這時(shí)色譜峰為拖尾峰;而有時(shí)隨著溶質(zhì)濃度增大,K也增大,這時(shí)色譜峰為前延峰。因此,只有盡可能減少進(jìn)樣量,使組分在柱內(nèi)濃度降低,K恒定時(shí),才能獲得正常峰。
  HPLC液相色譜儀色譜的特點(diǎn):
  高壓--壓力可達(dá)150~300 kg/cm。色譜柱每米降壓為75 kg/cm以上。
  高速--流速為0.1~10.0 mL/min。
  --塔板數(shù)可達(dá)5000/米。在一根柱中同時(shí)分離成份可達(dá)100種。
  高靈敏度--紫外檢測(cè)器靈敏度可達(dá)0.01ng。同時(shí)消耗樣品少。
  HPLC與經(jīng)典液相色譜相比有以下優(yōu)點(diǎn):
  速度快--通常分析一個(gè)樣品在15~30 min,有些樣品甚至在5 min內(nèi)即可完成。
  分辨率高--可選擇固定相和流動(dòng)相以達(dá)到合適分離效果。
  靈敏度高--紫外檢測(cè)器可達(dá)0.01ng,熒光和電化學(xué)檢測(cè)器可達(dá)0.1pg。
  色譜柱可反復(fù)使用--用一根色譜柱可分離不同的化合物。
  樣品量少,容易回收--樣品經(jīng)過(guò)色譜柱后不被破壞,可以收集單一組分或做制備。
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